NP-40裂解液

产品特色：

NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以 用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。裂解获得的蛋白可用BCA蛋白定量试剂盒（HAKATA 货号：HY-H500）进行蛋白浓度测定。

本品不含有酶抑制剂，使用时，需添加1% PMSF或者蛋白酶抑制剂混合液（100X）（HAKATA  货号：HDBM-1)用于蛋白酶抑制，若检测指标涉及磷酸化蛋白，还需添加磷酸酶抑制剂混合液（100X）（HAKATA 货号：HLSM-1)用于蛋白样品中磷酸酶抑制。

操作步骤：
1.细胞样本裂解：

取适量NP-40裂解液，在使用前加入1%PMSF（PMSF的终浓度为1mM）

贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。

悬浮细胞：离心收集细胞，VOTEX震荡几秒。按照6孔板每孔细胞加入 200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀.如果细胞量较多，则分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。

2.组织样本裂解：

将组织剪成小碎块，取适量NP-40裂解液，在使用前加入1%PMSF（PMSF的终浓度为1mM）。按照每20mg组织加入200ul裂解液。（若为不易裂解的组织可酌情多添加裂解液）

利用研磨器或者超声波裂解组织细胞。充分裂解后，按照10000-14000g离心，取上清，进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。

3.细菌或酵母：

对于1ml菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻vortex或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液，轻轻vortex或者弹击管底以混匀，冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果，使用本裂解液进行裂解时，需要单独加入溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化或者超声破碎。

保存温度：

保存：4℃，运输：4℃或RT，有效期：24个月

注意事项：

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。