lip2000高效DNA TR

 LIP2000转染试剂 

4°C储存 ，避光保存2年

lip2000高效DNA TR是一种新型的阳离子脂质体转染试剂适合于将核酸DNA转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

lip2000高效DNA TR转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。

lip2000高效DNA TR主要适用于DNA 等单一成分的细胞转染。

lip2000高效DNA TR转染过表达质粒后，通常24～48 h后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48 h 显著高于转染后24 h。

lip2000高效DNA TR转染细胞时，基本不受细胞培养液中血清影响，即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染4～6 h 后可去除转染液。

产品信息

产品名称	货号	规格
Lip2000转染试剂	HZ-015	1.5ml

使用方法

DNA转染

对大多数细胞来说，DNA (ug) 与lip2000高效DNA TR (ul) 的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 以24孔板为例

贴壁细胞：转染前一天，用500 ul不含抗生素的培养基接种0.5～2×105 细胞，使之第二天能达到80～90% 融合。

悬浮细胞：在准备DNA-TR LIP2000 DNA复合物之前，用500 ul不含抗生素的培养基接种4～8×105 细胞即可。

2. 对每个转染样品，进行以下操作

a. 在 eppendorf 管里分别加入50 ul Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 ug DNA轻柔混匀（不能涡旋或离心），制成DNA稀释液。

b. 在另一个eppendorf管里分别加入50 ul Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和2.0 ul lip2000高效DNA TR（注意用前先混匀），轻柔混匀，制成lip2000高效DNA TR 稀释液，室温静置5分钟。

c. 将DNA稀释液和lip2000高效DNA TR稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA-lip2000高效DNA TR复合物。DNA - lip2000高效DNA TR复合物在室温下可稳定存在6小时。

3. 将DNA-lip2000高效DNA TR复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。

4. 在37℃ CO2培养箱中培养4～6小时后更换培养基，继续培养18～48小时。

5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。

 优化DNA转染

质粒DNA转染的优化为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和lip2000高效DNA TR的比例以及细胞密度进行优化，一般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA（ug）和lip2000高效DNA TR（ul） 的比例。

 不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及lip2000高效DNA TR用量

细胞培养板	每孔面积	培养基用量		DNA转染
		铺板培养基	稀释培养基	DNA	转染试剂
96 well	0.3 cm2	100 ul	2×25 ul	0.2 ug	0.5 ul
24 well	2 cm2	500 ul	2×50 ul	0.8 ug	2.0 ul
12 well	4 cm2	1 ml	2×100 ul	1.6 ug	4.0 ul
6 well	10 cm2	2 ml	2×250 ul	4.0 ug	10 ul
60 mm	20 cm2	5 ml	2×0.5 ml	8.0 ug	20 ul
10 cm	60 cm2	15 ml	2×1.5 ml	24 ug	60 ul

 Lip转染试剂用于不同细胞转染时用量参考（以.96孔板为例）

细胞型号	培养基	每孔细胞数	DNA的量	转染试剂量
293H	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
293FT	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
293E	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
293F	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
COS7	DMEM	1.5×104	0.4 ug	0.5 ul
hela	DMEM	2×104	0.3 ug	0.5 ul
Caco2	MEM	3.5×104	0.3 ug	0.75 ul
BHK21	MEM	2×104	0.2 ug	0.5 ul
CHO-DG44	DMEM+HT+pro	2×104	0.5 ug	0.5 ul
RAW264.7	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul

注意事项

1.使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。

2.转染前细胞必须处于良好的生长状态。

3.需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM®培养液或普通的DMEM 培养液。

4.lip 2000 高效 DNA TR转染试剂不能vortex 或离心，宜缓慢晃动混匀。

5.转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露空气中。

6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。