特点 | RPMI-1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 复苏5-7天,冻存次日发货 |
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特性 | 贴壁生长 上皮样 来源于日本人的肾脏肿瘤细胞。 可以移植到裸鼠。 | 优势 | STR原始数据图谱,支原体、真菌、细菌检测报告 T25瓶80%密度提供发货照片;≥1*106冻存管2支;二选一 1、提供代数靠前细胞 2、公司常年有不同买馈赠、促销等活动形式 3、价格优势 4、售后服务到位,专业技术一对一操作指导 |
特点 | RPMI-1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 复苏5-7天,冻存次日发货 |
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特性 | 贴壁生长 上皮样 来源于日本人的肾脏肿瘤细胞。 可以移植到裸鼠。 | 优势 | STR原始数据图谱,支原体、真菌、细菌检测报告 T25瓶80%密度提供发货照片;≥1*106冻存管2支;二选一 1、提供代数靠前细胞 2、公司常年有不同买馈赠、促销等活动形式 3、价格优势 4、售后服务到位,专业技术一对一操作指导 |
细胞接收处理过程:
1、请显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时 细胞状态的依据。
2、收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,不开瓶盖放培养 箱静置2-3小时稳定细胞状态。
3、镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液收集至离心管中,重新加入6ml完全培养基,放入37℃、5%CO2培养 箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存。
4、悬浮细胞需离心收集处理。抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心3-5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照 说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
(注意:若发货的是密封培养瓶,处理完后放入培养箱培养,记得培养瓶盖子拧松,初次传代最好使用T25培养瓶或6cm小皿1传2)
贴壁细胞漂浮的处理方法:
注意:部分细胞由于贴壁松散,会出现运输后漂浮,冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮,属于不可避免 因素,正确处理后均可以正常生长。
STEP1:将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm约250g-300g离心力,离心3-5min)去除旧培养基;
STEP2:用PBS重悬细胞,将所有细胞收集到一个离心管中,再次离心(1200rpm约250g-300g离心力,离心3-5min)去除PBS;
STEP3:加入1ml左右胰酶EDTA溶液,0.25%重悬细胞,混匀即可,建议震动离心管混匀,避免吹打细 胞,放入培养箱消化细胞,根据细胞特性决定消化时间(TM3、TM4、293 系列约1~2分钟);
注意:部分细胞不能使用胰酶消化,请注意查看细胞说明书;单颗漂浮的细胞不需要胰酶处理。
STEP 4:消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入3-5ml含10%以上血清的培养基混匀终止消化,离心(1200rpm 3min)去除胰酶;
STEP5:加入5ml左右的细胞完全培养基混匀,按比例接入无菌培养瓶中;
STEP6:显微镜下观察细胞是否成均匀分散的单颗细胞,若有3-5个成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁后待细胞生长稳定后再次传代消散细胞。
悬浮细胞收集的处理方法:
注意:瓶中运输培养基不能继续使用,请换用按照说明书培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。培养 悬浮细胞建议用未经TC处理的培养瓶。
STEP1:静置4h后,请将瓶内所有细胞收集至6个15ml 的离心管110g(1000rpm) 离心3min, 将所有离心 后的细胞沉淀收集到一个T25 培养瓶内,平放10分钟,镜下观察细胞密度,拍照记录后放入培养箱中继 续培养,第二天密度达到80%即可传代;
STEP2:悬浮细胞半换液处理:将培养瓶竖立在培养箱中静置1小时左右,轻轻吸掉瓶内3ml 培养 基,然后补给3ml 的细胞完全培养基,传代的时候可以直接补给5ml 细胞完全培养基,分两个培养瓶 培养,一般这样传代3次左右可以离心传代一次,去掉死细胞;
STEP3:悬浮细胞传代方法:观察细胞无碎片无死细胞的情况下,建议直接加入新鲜的细胞完全培养基直 接分瓶即可。
售后服务:
1.常温细胞为 T25 培养瓶发货,若收到细胞后状态差,活率低,请当天拍照记录,发给技术支持或 者销售人员;根据情况,不能调整或者调整培养一周后,状态没好转的,可给予重发细胞。
2. 收到细胞24小时内出现细菌、真菌、霉菌污染给于免费重发。4 8 小 时检测支原体阳性无条件重发 。(吸取上清至冰箱保存48小时之后检测的不算准确结果)收到细胞有污染现象,请于收货当天 及时拍照记录,提供清晰的照片(照片为原培养瓶未拆封外观照和显微镜下细胞状态的照片);在培养 瓶未开封的情况下,可给予重发细胞。
3.若收到细胞有漏液现象,请于收货当天及时拍照记录(照片为原培养瓶未拆封外观照和显微镜下细 胞状态的照片);请保留原瓶培养基,并将原瓶培养基转移到一个无菌的容器内培养,培养3天内出现 细胞污染现象,可给予重发细胞。
4. 收到常温细胞时状态无异常,用户自身操作导致细胞污染、细胞状态不佳、细胞冻存后复苏不活 的,不予免费重发。
5. 细胞培养时,使用其他非细胞培养体系外源试剂处理导致细胞出现问题,不予免费重发。
6.非细胞出厂质量问题,客户自身操作导致的细胞死亡,自收货日起一个月内可以申请低价二次购 买折扣(原代细胞除外)。
7.细胞相关实验受多种因素影响,非细胞鉴定问题,实验数据不理想的,不予退/换细胞。
常温细胞收货注意事项:
观察是否有异常现象
收到货后如发现有任何异常现象,如污染,漏液,细胞漂浮等,请拍照记录,并及时联系我们销售 人员或者技术支持。
将培养瓶放置培养箱中静止
用75%酒精擦拭瓶身,封口膜可以不用撕去,将 T25 瓶置于培养 箱中静置2~4h 后进行操作,(注意:悬浮细胞请将培养瓶竖立在 培养箱中静置),在此期间,请查看说明书以确定细胞属性。
观察细胞密度是否超过80%
观察细胞密度,若超过80%则可正常传代处理(有些原代细胞不 可传代,请仔细查阅细胞说明书并根据实际情况决定),首次传代推 荐比例1:2。
注意:传代比例指的是同等大小容器的前提下,如需更换培养容器,则需换算培 养容器贴壁面积,例如:一个T25 瓶的贴壁面积相当于1个6cm 的皿,1个10cm 的皿的贴壁面积相当于3个T25瓶,1个T75瓶的贴壁面积相当于3个T25 瓶。
观察细胞密度,若细胞密度不到80%,建议吸出运输培养基,加入5ml 细胞完全培养基,培养到可传代密度。
特殊细胞收到注意事项
部分细胞由于贴壁不牢在运输过程中发生细胞脱落,这是正常现象,正确处理后都可以正常生长。
1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm3-5min)去除旧培养基;
2、用PBS重悬细胞,将所有细胞收集到一个离心管中,再次离心(1200rpm3-5min)去除PBS;
3、加入1ml左右0.25%胰酶重悬细胞,混匀即可,不能吹打太多次,放入培养箱消化,根据细胞特性决定消化时间(约1~2分钟);
4、消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入3-5ml完全培养基混匀以终止消化,离心(1200rpm3-5min) 去除胰酶;
5、加入5ml左右细胞相应的完全培养基混匀,按比例接入无菌培养瓶/皿中;
6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞,若有3-5个成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁,待细胞生长稳定后再 消散细胞。
慧颖官方客服
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