HGF+SV40T细胞，人牙龈成纤维细胞

HGF+SV40T 人牙龈成纤维细胞

国内永生化建系

细胞鉴定

免疫荧光染色鉴定

细胞来源

国家资源库

细胞背景

比较了从健康和患病的人牙龈中获得的成纤维细胞的胶原蛋白合成。用放射性氨基酸标记细胞，通过CM-纤维素色谱和溴化氰肽分析对合成的胶原蛋白进行NaCl分级分离后表征。研究了2个细胞系，5个来自健康牙龈，1个来自患有慢性炎症性牙周炎的牙龈，2个来自急性发炎的牙龈。所有细胞系主要合成I型胶原蛋白。III型胶原蛋白是所有细胞系的次要产物，除了来自患病组织的细胞系。来自患病牙龈的六个细胞系中的五个和来自急性发炎组织的两个细胞系中的两个合成了可溶于1.3M NaCl的胶原蛋白。α1/α3比率和溴化氰肽图谱表明该级分含有α1[I]3型胶原蛋白。α<>[I]<>胶原蛋白在从健康牙龈获得的成纤维细胞系中检测不到。发炎的人牙龈似乎含有成纤维细胞，其表型与正常组织的细胞不同，因为它们能够合成α<>[I]<>胶原蛋白。

细胞特性

形态：成纤维细胞样，贴壁生长。用途：仅供科研使用。

培养条件

1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；p/s双抗，1%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

注意事项

贴壁细胞参考：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

悬浮细胞参考：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。

运输形式

常温发货：收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。

干冰发货：常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，第一个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。

生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。