人髓核细胞永生化
细胞鉴定：免疫荧光鉴定已通过
细胞来源：国内建系
细胞背景：髓核，是乳白色半透明胶状体，富于弹性，为椎间盘结构的一部分，位于两软骨板与纤维环 之间。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质。 发育成熟的髓核是一个由软骨样细胞分散在细胞间质内，周围围绕着一个比较致密的胶原纤 维网的含水球，位于椎间盘偏后位置，占推间盘横断面积的 50%～60%；由于它的含水量很高， 并和软骨终板紧密接触，是椎间盘接受经软骨终板主要营养途径渗透交换营养的主要部分。 该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40 基因
细胞特性：形态：成纤维细胞样，贴壁生长
用途：仅供科研使用。
培养条件：1） 准备软骨细胞专用培养体系；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
注意事项：
常温发货：收到后 T25 瓶消毒再放置培养箱静置 2-3 小时后观察密度和状态拍照 2-3 张反馈给 销售，密度达标就可以传代。前期传代比例 1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1 个 1ml 冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存 2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。
干冰发货：常规细胞发货冻存管 2 只，复苏 1 只，另外一只备用，第一个复苏不成功时严格 按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。
贴壁细胞参考：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞 1-2 次。
2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL）， 置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下 观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml含 10%FBS 的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。 将细胞悬液按 1：2 的比例分到新T25瓶/6cm 培养皿中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。 3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新 配制的完全培养基来培养细胞。
悬浮细胞参考：
悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在 1×105~1×106 个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正 常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 1000rpm，离心5min，弃去上清，补加 1-2mL 培养液后重悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。
运输形式
低温:1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干
冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
常温: T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
生物安全
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液
氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
