一、贴壁细胞
1.用 75%酒精喷洒整个瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行 2-3 小
时的缓冲,
.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,
再往其中加入 5-6mL 新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据
细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;
2.待细胞长满瓶底面积 80%-90%,需要对其进行传代,第一次传代
比例为 1:2。
3 传代步骤:将 0.25%含 EDTA 胰酶置于 37°预热,倒掉培养瓶中的
培养基,往培养瓶中加入 1mlPBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加 1ml
预热好的胰酶,置于 37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显
微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落
为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好
后加入 1ml 完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,
使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm 离心 3min,弃上清,
加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
二、悬浮细胞
1.用 75%酒精喷洒整个瓶消毒,然后置于无菌操作台,打开瓶口,
轻轻吹打后,将其中的细胞悬液转移到离心管中,然后 1200rpm 离
心 3min,去上清;
2.将离心好的细胞转移至 T-25 瓶中,并加入 5-6mL 新鲜培养基,然
后将其置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变
化对其进行换液(离心后去旧液,加入新鲜培养基);
3.显微镜观察细胞数目比较多时,对其进行传代,第一次传代比例
为 1:2(离心后平均分成两瓶培养)。