1×10⁶cells/T25培养瓶

　　培养条件：RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗

　　常温细胞收货当天处理方式

　　1.收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

　　2. 镜下观察有无微生物污染现象，拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象， 方便后续售后处理。

　　3. 消毒后，更换赠送的培养液放置培养箱静止2-3小时。如细胞有多数悬浮细胞需要离心收集重新接种止培养瓶。

　　4. 观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代，请根据实际情况决定)，传代推荐比例 1：2 到 1：3(按实际收货细胞密度决定，若不确定 可联系技术支持);若细胞密度不到 80%则可继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。

　　5. 由于气温，运输等影响造成贴壁细胞漂浮的，请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代(参考附件)，或及时联系技术支持进行指导传代。贴壁细胞传代：1.从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃;2.从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入预热的胰酶;胰酶量应足以覆盖细胞层(T25为1ml);4.将培养容器在室温下孵育约 2分钟(请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异);5.在显微镜下观察细胞解离情况;如果解离程度未达 90%，可将孵育时间延长几分钟，每 30 秒钟检查一次解离情况;6.细胞解离程度大于等于 90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽;加入所用解离剂两倍体积的预热生长培养基;吹打细胞层表面数次，使培养基分散;7.将细胞转移到15mL 无菌离心管中，以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟(请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异);8.用最少体积的预热生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱(注：如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖)。

　　悬浮细胞传代：将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm 离心 5min，收集上清，加 1-2ml 培养基重悬，按 1:2 比例进行比例传代分到新T25瓶中，补充5-8ml/瓶新的培养基 ，最后放入细胞培养箱中培养。